馬鈴薯莖尖脫毒是馬鈴薯生產(chǎn)重要源頭，也是質(zhì)量關(guān)的重中之重；因此馬鈴薯莖尖脫毒也是把控的重要部分。

   一、脫毒材料選取
       1、馬鈴薯脫毒材料的選取
       田間選擇在現(xiàn)蕾到開(kāi)花期選擇生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，具備原品種典型性狀的健康植株做好標(biāo)記。生育后期到收獲期，在已做標(biāo)記的植株中進(jìn)行薯塊復(fù)選。選擇性狀符合原品種特征的幼齡薯，拿回實(shí)驗(yàn)室催芽作為脫毒材料。
       2、催芽處理
       塊莖可通過(guò)自然方法出芽或通過(guò)人工方法打破休眠。自然出芽的情況下，塊莖長(zhǎng)出2~3cm的新芽；人工打破休眠催芽的情況下，可采用0.1%多菌靈溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min，置于25℃黑暗條件下催芽。
       二、莖尖培養(yǎng)
     （1）莖尖培養(yǎng)基制備
      1、莖尖培養(yǎng)基配方
①M(fèi)S+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
       2、MS培養(yǎng)基
       3、將制備好的培養(yǎng)基快速分裝于容器內(nèi)，用封口膜封口，121℃高壓滅菌20min，冷卻后在無(wú)菌貯存室放置3~5d,無(wú)污染的培養(yǎng)基放到超凈工作臺(tái)備用。
     （2）莖尖剝離
       1、材料消毒
       取經(jīng)催芽處理或自然出芽的塊莖的頂芽、2~3cm的側(cè)芽，用自來(lái)水沖洗30min后，移入接種室進(jìn)行嚴(yán)格消毒。先用75%乙醇浸泡30s，再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min，然后用無(wú)菌水沖洗4~5次。
       2、莖尖剝離與接種
       接種在超凈工作臺(tái)上操作。剝?nèi)ネ馊~，借助40倍雙目解剖鏡，剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長(zhǎng)點(diǎn)，用解剖針或刀從0.1~0.3mm處切，帶1~2個(gè)葉原基。迅速接種于盛有莖尖培養(yǎng)基的容器中，進(jìn)行離體培養(yǎng)。用酒精燈灼燒容器口并封口，在容器上注明編號(hào)、品種名稱(chēng)，接種日期。待看到明顯伸長(zhǎng)得小莖、葉原基形成可見(jiàn)的小葉時(shí)，轉(zhuǎn)移到盛有MS培養(yǎng)基的容器內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)成4~5個(gè)葉片的試管苗。
       3、培養(yǎng)條件
       試管苗在溫度20~25℃、相對(duì)濕度70%、光照強(qiáng)度2000~3000Lx條件下培養(yǎng)，光照時(shí)數(shù)16h/d。
       4、病毒檢測(cè)
① 將試管苗按瓶上的編號(hào)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將植株的上部1/3~1/2莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基瓶中，編號(hào)不變。
② 同時(shí)將植株下部1/3~1/2莖段稱(chēng)取0.2g裝入病毒檢測(cè)的樣品袋中。取樣時(shí)樣品不能粘有培養(yǎng)基。
③ 檢測(cè)方法用ELISA（雙抗體夾心法）,篩選出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脫毒苗。
       三、試種觀察
       經(jīng)檢測(cè)不帶病毒的試管苗進(jìn)行試種觀察。將每個(gè)試管苗取出部分移栽到防蟲(chóng)網(wǎng)棚，結(jié)出的小薯種植到田間試種觀察，檢驗(yàn)其是否發(fā)生變異，符合原品種的典型性狀的脫毒苗即為核心苗。馬鈴薯莖尖脫毒是馬鈴薯生產(chǎn)重要源頭，也是質(zhì)量關(guān)的重中之重；因此馬鈴薯莖尖脫毒也是把控的重要部分。
       一、脫毒材料選取
       1、馬鈴薯脫毒材料的選取
       田間選擇在現(xiàn)蕾到開(kāi)花期選擇生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，具備原品種典型性狀的健康植株做好標(biāo)記。生育后期到收獲期，在已做標(biāo)記的植株中進(jìn)行薯塊復(fù)選。選擇性狀符合原品種特征的幼齡薯，拿回實(shí)驗(yàn)室催芽作為脫毒材料。
       2、催芽處理
       塊莖可通過(guò)自然方法出芽或通過(guò)人工方法打破休眠。自然出芽的情況下，塊莖長(zhǎng)出2~3cm的新芽；人工打破休眠催芽的情況下，可采用0.1%多菌靈溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min，置于25℃黑暗條件下催芽。
       二、莖尖培養(yǎng)
     （1）莖尖培養(yǎng)基制備
       1、莖尖培養(yǎng)基配方
①M(fèi)S+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
       2、MS培養(yǎng)基
       3、將制備好的培養(yǎng)基快速分裝于容器內(nèi)，用封口膜封口，121℃高壓滅菌20min，冷卻后在無(wú)菌貯存室放置3~5d,無(wú)污染的培養(yǎng)基放到超凈工作臺(tái)備用。
       （2）莖尖剝離
       1、材料消毒
       取經(jīng)催芽處理或自然出芽的塊莖的頂芽、2~3cm的側(cè)芽，用自來(lái)水沖洗30min后，移入接種室進(jìn)行嚴(yán)格消毒。先用75%乙醇浸泡30s，再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min，然后用無(wú)菌水沖洗4~5次。
       2、莖尖剝離與接種
       接種在超凈工作臺(tái)上操作。剝?nèi)ネ馊~，借助40倍雙目解剖鏡，剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長(zhǎng)點(diǎn)，用解剖針或刀從0.1~0.3mm處切，帶1~2個(gè)葉原基。迅速接種于盛有莖尖培養(yǎng)基的容器中，進(jìn)行離體培養(yǎng)。用酒精燈灼燒容器口并封口，在容器上注明編號(hào)、品種名稱(chēng)，接種日期。待看到明顯伸長(zhǎng)得小莖、葉原基形成可見(jiàn)的小葉時(shí)，轉(zhuǎn)移到盛有MS培養(yǎng)基的容器內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)成4~5個(gè)葉片的試管苗。
       3、培養(yǎng)條件
       試管苗在溫度20~25℃、相對(duì)濕度70%、光照強(qiáng)度2000~3000Lx條件下培養(yǎng)，光照時(shí)數(shù)16h/d。
       4、病毒檢測(cè)
① 將試管苗按瓶上的編號(hào)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將植株的上部1/3~1/2莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基瓶中，編號(hào)不變。
② 同時(shí)將植株下部1/3~1/2莖段稱(chēng)取0.2g裝入病毒檢測(cè)的樣品袋中。取樣時(shí)樣品不能粘有培養(yǎng)基。
③ 檢測(cè)方法用ELISA（雙抗體夾心法）,篩選出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脫毒苗。
       三、試種觀察
       經(jīng)檢測(cè)不帶病毒的試管苗進(jìn)行試種觀察。將每個(gè)試管苗取出部分移栽到防蟲(chóng)網(wǎng)棚，結(jié)出的小薯種植到田間試種觀察，檢驗(yàn)其是否發(fā)生變異，符合原品種的典型性狀的脫毒苗即為核心苗。馬鈴薯莖尖脫毒是馬鈴薯生產(chǎn)重要源頭，也是質(zhì)量關(guān)的重中之重；因此馬鈴薯莖尖脫毒也是把控的重要部分。
       一、脫毒材料選取
       1、馬鈴薯脫毒材料的選取
       田間選擇在現(xiàn)蕾到開(kāi)花期選擇生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，具備原品種典型性狀的健康植株做好標(biāo)記。生育后期到收獲期，在已做標(biāo)記的植株中進(jìn)行薯塊復(fù)選。選擇性狀符合原品種特征的幼齡薯，拿回實(shí)驗(yàn)室催芽作為脫毒材料。
       2、催芽處理
       塊莖可通過(guò)自然方法出芽或通過(guò)人工方法打破休眠。自然出芽的情況下，塊莖長(zhǎng)出2~3cm的新芽；人工打破休眠催芽的情況下，可采用0.1%多菌靈溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min，置于25℃黑暗條件下催芽。
       二、莖尖培養(yǎng)
      （1）莖尖培養(yǎng)基制備
       1、莖尖培養(yǎng)基配方
①M(fèi)S+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
       2、MS培養(yǎng)基
       3、將制備好的培養(yǎng)基快速分裝于容器內(nèi)，用封口膜封口，121℃高壓滅菌20min，冷卻后在無(wú)菌貯存室放置3~5d,無(wú)污染的培養(yǎng)基放到超凈工作臺(tái)備用。
      （2）莖尖剝離
       1、材料消毒
       取經(jīng)催芽處理或自然出芽的塊莖的頂芽、2~3cm的側(cè)芽，用自來(lái)水沖洗30min后，移入接種室進(jìn)行嚴(yán)格消毒。先用75%乙醇浸泡30s，再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min，然后用無(wú)菌水沖洗4~5次。
       2、莖尖剝離與接種
       接種在超凈工作臺(tái)上操作。剝?nèi)ネ馊~，借助40倍雙目解剖鏡，剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長(zhǎng)點(diǎn)，用解剖針或刀從0.1~0.3mm處切，帶1~2個(gè)葉原基。迅速接種于盛有莖尖培養(yǎng)基的容器中，進(jìn)行離體培養(yǎng)。用酒精燈灼燒容器口并封口，在容器上注明編號(hào)、品種名稱(chēng)，接種日期。待看到明顯伸長(zhǎng)得小莖、葉原基形成可見(jiàn)的小葉時(shí)，轉(zhuǎn)移到盛有MS培養(yǎng)基的容器內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)成4~5個(gè)葉片的試管苗。
       3、培養(yǎng)條件
       試管苗在溫度20~25℃、相對(duì)濕度70%、光照強(qiáng)度2000~3000Lx條件下培養(yǎng)，光照時(shí)數(shù)16h/d。
       4、病毒檢測(cè)
① 將試管苗按瓶上的編號(hào)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將植株的上部1/3~1/2莖段轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基瓶中，編號(hào)不變。
② 同時(shí)將植株下部1/3~1/2莖段稱(chēng)取0.2g裝入病毒檢測(cè)的樣品袋中。取樣時(shí)樣品不能粘有培養(yǎng)基。
③ 檢測(cè)方法用ELISA（雙抗體夾心法）,篩選出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脫毒苗。
       三、試種觀察
       經(jīng)檢測(cè)不帶病毒的試管苗進(jìn)行試種觀察。將每個(gè)試管苗取出部分移栽到防蟲(chóng)網(wǎng)棚，結(jié)出的小薯種植到田間試種觀察，檢驗(yàn)其是否發(fā)生變異，符合原品種的典型性狀的脫毒苗即為核心苗。